唐山市分子診斷試劑原材料研發(fā)
發(fā)布時(shí)間：2023-02-19 01:34:14
唐山市分子診斷試劑原材料研發(fā)
相對(duì)分子質(zhì)量為94的Taq DNA聚合酶的活性較高，大約為200000 U/mg，在合成DNA時(shí)有一個(gè)較高的適溫度75～80℃。Taq DNA聚合酶雖然在90℃以上合成DNA的能力有限，但高溫時(shí)仍比較穩(wěn)定。有實(shí)驗(yàn)證明，在92.5℃、95℃和97.5℃時(shí)，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別經(jīng)130 min、40 min和5～6 min后，仍可保持百分之50左右的活性，其半衰期較長(zhǎng)。所以，在一個(gè)PCR預(yù)備試驗(yàn)中，每次循環(huán)時(shí)上限溫度為95℃處理20S，則循環(huán)50次后Taq DNA聚合酶仍可保持百分之65的活性，能夠保證實(shí)驗(yàn)的需要。
唐山市分子診斷試劑原材料研發(fā)
強(qiáng)化監(jiān)督檢查。中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所要加強(qiáng)疫苗質(zhì)量監(jiān)管工作，開展監(jiān)督抽檢，對(duì)生產(chǎn)企業(yè)實(shí)行督導(dǎo)檢查。各級(jí)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門要加強(qiáng)對(duì)轄區(qū)內(nèi)強(qiáng)制免疫疫苗生產(chǎn)企業(yè)的監(jiān)督檢查，督促生產(chǎn)企業(yè)嚴(yán)格執(zhí)行獸藥生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）。實(shí)施獸藥“二維碼”管理制度，加強(qiáng)疫苗追蹤和全程質(zhì)量監(jiān)管，嚴(yán)厲打擊制售假劣疫苗行為。對(duì)拒不履行強(qiáng)制免疫義務(wù)、因免疫不到位引發(fā)動(dòng)物疫情的單位和個(gè)人，要依法處理并追究責(zé)任。
唐山市分子診斷試劑原材料研發(fā)
常規(guī)普通PCR常見問(wèn)題：1. 優(yōu)化反應(yīng)條件，梯度摸索退火溫度，延長(zhǎng)退火延伸時(shí)間，增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)（30-45區(qū)間為宜）。2. 對(duì)核酸模板進(jìn)行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進(jìn)行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應(yīng)體系（預(yù)混體系除外），改變檢測(cè)體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設(shè)計(jì)引物，避免引物二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復(fù)凍融次數(shù)。
唐山市分子診斷試劑原材料研發(fā)
Taq酶的酶動(dòng)力與擴(kuò)增效率有關(guān)。一般熱啟動(dòng)Taq酶的酶動(dòng)力越強(qiáng)，PCR擴(kuò)增的指數(shù)增長(zhǎng)期越長(zhǎng)，‘S型’曲線更加典型，熒光信號(hào)值更高，而且更適合做多重PCR檢測(cè)。我們?cè)容^過(guò)多家公司的熱啟動(dòng)Taq酶，在國(guó)外品牌中，英國(guó)Bioline公司的熱啟動(dòng)Taq酶，酶動(dòng)力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時(shí)的熒光信號(hào)值高。在國(guó)內(nèi)品牌中，BIOG熱啟動(dòng)Taq酶的指數(shù)期較長(zhǎng)，可做3重PCR，且擴(kuò)增曲線的‘S’型不受影響，其它的國(guó)產(chǎn)品牌一般只能支持2重反應(yīng)，在做3重反應(yīng)時(shí)，擴(kuò)增曲線低矮，熒光信號(hào)值較低，無(wú)典型擴(kuò)增曲線，結(jié)果很難判定。