通化市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
發(fā)布時(shí)間：2022-10-11 01:36:11
通化市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
人們生活水平不斷提升,對(duì)食品質(zhì)量安 全提出更高的要求,檢疫工作不斷深入與完善,僅依靠感觀檢查已遠(yuǎn)不能滿足當(dāng)今工作的需要,須使病理化驗(yàn)室發(fā)揮的作用.為更好地配合產(chǎn)地檢疫,屠宰檢疫及農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的肉食品檢疫,根據(jù)《動(dòng)物防疫法》,《食品衛(wèi)生法》,《定點(diǎn)屠宰管理辦法》及相關(guān)法律法規(guī)的精神,結(jié)合實(shí)際工作需要,高度重視動(dòng)物的防疫工作.而動(dòng)物疫病的診斷離不開先進(jìn)的技術(shù)和設(shè)備,該文主要圍繞動(dòng)物疫病診斷化驗(yàn)室操作中常見的問題進(jìn)行分析.
通化市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
在動(dòng)物疫病診斷中，化驗(yàn)室的操作較為關(guān)鍵，對(duì)診斷的結(jié)果有直接的影響。但是，在當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室操作中還存在一-些問題，如檢測(cè)操作中、檢測(cè)報(bào)告中未填寫、不開具《檢測(cè)委托書》等這些問題的存在嚴(yán)重影響動(dòng)物疫病的診斷，不利于動(dòng)物疫病的防控。因此，在今后工作中，需要對(duì)相關(guān)工作制度進(jìn)行不斷地完善，促使化驗(yàn)室的操作更加規(guī)范化、科學(xué)化;加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員的專業(yè)培訓(xùn)，提高其操作水平。只有這樣才能提高動(dòng)物疫病檢測(cè)的準(zhǔn)確性，為我國的動(dòng)物疫病防控工作做好鋪墊。
通化市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
熱啟動(dòng)Taq酶的產(chǎn)生：在PCR的反應(yīng)過程中，主要有三個(gè)階段：變性、復(fù)性、延伸。Taq DNA聚合酶的復(fù)性溫度是72℃，但其在低溫下也有活性（活性較弱），也能催化引物與模板復(fù)性，只是錯(cuò)配率高，發(fā)生非特異性復(fù)性機(jī)率大。這樣在未達(dá)到72℃之前，反應(yīng)在Taq酶聚合下不斷擴(kuò)增出非特異性產(chǎn)物，而使實(shí)驗(yàn)失敗。在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中，這樣由低溫上升至高溫的過程中，引物錯(cuò)配和二聚體的形成機(jī)率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是讓PCR反應(yīng)一開始就在大于70℃下進(jìn)行。當(dāng)溫度較低時(shí)，酶活性被封閉，當(dāng)溫度大于一定溫度時(shí)酶又開始工作。這樣就避免了在低溫下復(fù)性、延伸的過程，消除引物錯(cuò)配和二聚體形成，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。我們是如何對(duì)Hotstart Taq酶修飾而讓它只在高溫下才能發(fā)揮活性？這就是Hot Start taq酶的作用原理。
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傳染病流行過程的三:個(gè)基本環(huán)節(jié):①傳染源。即傳染來源，就是被感染的動(dòng)物，包括傳染病病畜禽和帶菌(毒)動(dòng)物，如潛伏期帶菌(毒)、病愈后帶菌(毒)及健康動(dòng)物帶菌(毒)等。②傳播方式和途徑。有直接接觸傳播及間接接觸傳播。③易感動(dòng)物。就是對(duì)某種傳染病的病原體有易感性的動(dòng)物。
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常規(guī)普通PCR常見問題：1. 優(yōu)化反應(yīng)條件，梯度摸索退火溫度，延長(zhǎng)退火延伸時(shí)間，增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)（30-45區(qū)間為宜）。2. 對(duì)核酸模板進(jìn)行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進(jìn)行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應(yīng)體系（預(yù)混體系除外），改變檢測(cè)體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設(shè)計(jì)引物，避免引物二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復(fù)凍融次數(shù)。
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動(dòng)物傳染病的預(yù)防措施:.①加強(qiáng)科:學(xué)的飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)機(jī)體抗病能力。②加強(qiáng)檢疫。對(duì)引種、畜禽集貿(mào)市場(chǎng)、畜禽屠宰場(chǎng)的動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格檢疫。嚴(yán)禁染疫動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品的流通。對(duì)檢疫時(shí)發(fā)現(xiàn)的染疫動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品應(yīng)按國家的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行無害化處理。③預(yù)防消毒。開展經(jīng)常性的消毒，可以有效地殺滅外界環(huán)境中的病原體，從而達(dá)到預(yù)防傳染病發(fā)生的目的。④預(yù)防接種。通過對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種疫苗，增強(qiáng)其對(duì)某些疫病的特異性抵抗力，是防止動(dòng)物疫病發(fā)生的一個(gè)很重要的有效措施。⑤藥物預(yù)防。在日糧和飲水中加人適量抗生素或驅(qū)蟲藥，以達(dá)到預(yù)防疾病發(fā)生的目的。