盤(pán)錦市熱啟動(dòng)Taq酶廠家
發(fā)布時(shí)間:2024-03-15 01:16:35
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動(dòng)物檢疫的分類(lèi):根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行的動(dòng)物檢疫法律規(guī)定,我國(guó)動(dòng)物檢疫分為進(jìn)出境檢疫和國(guó)內(nèi).檢疫兩大類(lèi)。①進(jìn)出境動(dòng)物檢疫。是指對(duì)進(jìn)出我國(guó)國(guó)境的動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品,由口岸動(dòng)植物檢疫機(jī)關(guān)實(shí)施的檢疫。具體分為:進(jìn)境動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品檢疫;出境動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品檢疫;過(guò)境動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品檢疫;②國(guó)內(nèi)檢疫。指對(duì)國(guó)內(nèi)流動(dòng)的動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品所進(jìn)行的檢疫。具體劃分為:產(chǎn)地檢疫、屠宰檢疫、動(dòng)物產(chǎn)品檢疫。

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分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補(bǔ)序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則締合成異質(zhì)雙鏈的過(guò)程,稱(chēng)為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測(cè)核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對(duì)特定DNA或RNA序列進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。2.聚合酶鏈反應(yīng)(即Polymerase chain reaction,PCR)原理:PCR是模板DNA,引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸(dNTP)在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應(yīng),擴(kuò)增出所需目的DNA。包括三個(gè)基本步驟:雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈(變性);在低溫下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對(duì)(退火);在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來(lái)的分子生物學(xué)與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測(cè)技術(shù)。起初的生物芯片技術(shù)主要目標(biāo)是用于DNA序列測(cè)定、基因表達(dá)譜鑒定和基因突變體檢測(cè)和分析,所以又稱(chēng)為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于這一技術(shù)已擴(kuò)展至免疫反應(yīng)、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域,出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片等,所以改稱(chēng)生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢(shì)。

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常規(guī)普通PCR常見(jiàn)問(wèn)題:1. 優(yōu)化反應(yīng)條件,梯度摸索退火溫度,延長(zhǎng)退火延伸時(shí)間,增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)(30-45區(qū)間為宜)。2. 對(duì)核酸模板進(jìn)行純化,或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進(jìn)行提取,增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應(yīng)體系(預(yù)混體系除外),改變檢測(cè)體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量,更換體系中Buffer。4. 重新設(shè)計(jì)引物,避免引物二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu),在一次稀釋引物后可分裝成多支小管,減少反復(fù)凍融次數(shù)。

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選擇靈敏度高的熱啟動(dòng)Taq酶。一般說(shuō),Taq酶的擴(kuò)增效率高,靈敏度就高,但也有不一致的情況。如果要擴(kuò)增的樣本目標(biāo)基因豐度較低,建議對(duì)Taq酶的擴(kuò)增靈敏度進(jìn)行檢測(cè)。常見(jiàn)的檢測(cè)方法是將目標(biāo)基因質(zhì)粒片段進(jìn)行10倍或5倍梯度稀釋?zhuān)谳^低的幾個(gè)稀釋度進(jìn)行PCR檢測(cè),選擇檢測(cè)靈敏度較高的熱啟動(dòng)Taq酶。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上常用的ABI、Bioline、Biog的擴(kuò)增靈敏度都比較高,但知名品牌T的靈敏度略低,研究者可根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行選擇。

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隨著對(duì)動(dòng)物檢疫工作的發(fā)展與完善,僅依靠獸醫(yī)的經(jīng)驗(yàn)檢查已經(jīng)不能滿(mǎn)足現(xiàn)今動(dòng)物疫病診斷的需求,因此,病理化驗(yàn)室開(kāi)始發(fā)揮重要作用.如藍(lán)耳病的病原學(xué)檢測(cè)方式需要采集病豬的扁桃體,淋巴結(jié),肺,肝,脾等,利用10%的中性福爾馬林進(jìn)行固定,經(jīng)過(guò)石蠟切片,HE染色之后使用光鏡對(duì)樣本進(jìn)行病理學(xué)組織檢查得出結(jié)論,又如豬瘟的病理學(xué)檢查方式主要有免疫熒光實(shí)驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),核酸探針技術(shù),基因芯片檢測(cè)技術(shù)等.

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Taq酶的酶動(dòng)力與擴(kuò)增效率有關(guān)。一般熱啟動(dòng)Taq酶的酶動(dòng)力越強(qiáng),PCR擴(kuò)增的指數(shù)增長(zhǎng)期越長(zhǎng),‘S型’曲線更加典型,熒光信號(hào)值更高,而且更適合做多重PCR檢測(cè)。我們?cè)容^過(guò)多家公司的熱啟動(dòng)Taq酶,在國(guó)外品牌中,英國(guó)Bioline公司的熱啟動(dòng)Taq酶,酶動(dòng)力較好,可做4重PCR,等量起始模板CT30時(shí)的熒光信號(hào)值高。在國(guó)內(nèi)品牌中,BIOG熱啟動(dòng)Taq酶的指數(shù)期較長(zhǎng),可做3重PCR,且擴(kuò)增曲線的‘S’型不受影響,其它的國(guó)產(chǎn)品牌一般只能支持2重反應(yīng),在做3重反應(yīng)時(shí),擴(kuò)增曲線低矮,熒光信號(hào)值較低,無(wú)典型擴(kuò)增曲線,結(jié)果很難判定。