沈陽(yáng)市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀優(yōu)質(zhì)
發(fā)布時(shí)間：2023-11-05 01:24:45
沈陽(yáng)市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀優(yōu)質(zhì)
熱啟動(dòng)Taq酶的產(chǎn)生：在PCR的反應(yīng)過(guò)程中，主要有三個(gè)階段：變性、復(fù)性、延伸。Taq DNA聚合酶的復(fù)性溫度是72℃，但其在低溫下也有活性（活性較弱），也能催化引物與模板復(fù)性，只是錯(cuò)配率高，發(fā)生非特異性復(fù)性機(jī)率大。這樣在未達(dá)到72℃之前，反應(yīng)在Taq酶聚合下不斷擴(kuò)增出非特異性產(chǎn)物，而使實(shí)驗(yàn)失敗。在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中，這樣由低溫上升至高溫的過(guò)程中，引物錯(cuò)配和二聚體的形成機(jī)率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是讓PCR反應(yīng)一開(kāi)始就在大于70℃下進(jìn)行。當(dāng)溫度較低時(shí)，酶活性被封閉，當(dāng)溫度大于一定溫度時(shí)酶又開(kāi)始工作。這樣就避免了在低溫下復(fù)性、延伸的過(guò)程，消除引物錯(cuò)配和二聚體形成，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。我們是如何對(duì)Hotstart Taq酶修飾而讓它只在高溫下才能發(fā)揮活性？這就是Hot Start taq酶的作用原理。
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由于應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，分子診斷行業(yè)在全球得到了飛速發(fā)展。隨著靶向治療逐漸成為腫瘤準(zhǔn)確治療的重要方法，釋放更多腫瘤個(gè)性化用藥檢測(cè)（伴隨檢測(cè)）需求。新靶向藥不斷推出和個(gè)性化用藥檢測(cè)滲透率提升，推動(dòng)了個(gè)性化用藥檢測(cè)行業(yè)的快速發(fā)展?；驕y(cè)序已在無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)（NIPT）大規(guī)模應(yīng)用，并基于全 面二孩政策推動(dòng)需求快速增長(zhǎng)。未來(lái)隨著技術(shù)進(jìn)步和成本下降，基因測(cè)序在腫瘤早篩和個(gè)人基因組檢測(cè)領(lǐng)域中應(yīng)用前景更廣。
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常規(guī)普通PCR常見(jiàn)問(wèn)題：1. 優(yōu)化反應(yīng)條件，梯度摸索退火溫度，延長(zhǎng)退火延伸時(shí)間，增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)（30-45區(qū)間為宜）。2. 對(duì)核酸模板進(jìn)行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進(jìn)行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應(yīng)體系（預(yù)混體系除外），改變檢測(cè)體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設(shè)計(jì)引物，避免引物二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復(fù)凍融次數(shù)。
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世界各國(guó)高度重視分子診斷技術(shù)的發(fā)展，基因芯片將成為新一代分子診斷試劑開(kāi)發(fā)的主流。基因芯片是分子生物學(xué)、微電子、計(jì)算機(jī)等多學(xué)科結(jié)合的結(jié)晶，綜合了多種現(xiàn)代高精尖技術(shù)，被專家譽(yù)為“診斷行業(yè)產(chǎn)品”。基因芯片具有同時(shí)能夠檢測(cè)多個(gè)靶點(diǎn)的功能，具有快速有效的特點(diǎn)。因而基因芯片成為新一代分子診斷試劑的主要開(kāi)發(fā)方向，但其成本高、開(kāi)發(fā)難度大，產(chǎn)品種類很少，只用于科研和藥物篩選等用途?；蛐酒拇笠?guī)模臨床應(yīng)用還存在尚未克服的技術(shù)缺陷，主要是由于芯片診斷特異性和靈敏度低、芯片診斷成本高昂和芯片診斷配套儀器價(jià)格昂貴等原因。
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做好經(jīng)費(fèi)支持。按照《財(cái)政部、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于修訂印發(fā)農(nóng)業(yè)相關(guān)轉(zhuǎn)移支付資金管理辦法的通知》（財(cái)農(nóng)〔2020〕10號(hào)）要求，對(duì)國(guó)家確定的強(qiáng)制免疫病種，財(cái)政切塊下達(dá)補(bǔ)助資金，統(tǒng)籌支持各省份開(kāi)展強(qiáng)制免疫、免疫效果監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)、疫病監(jiān)測(cè)和凈化、人員防護(hù)，以及實(shí)施強(qiáng)制免疫計(jì)劃、購(gòu)買防疫服務(wù)等。開(kāi)展宣傳培訓(xùn)。各省份要充分利用各類媒體，加大國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫政策的宣傳力度，提升養(yǎng)殖者自主免疫意識(shí)，提高科學(xué)養(yǎng)殖和防疫水平。要制定動(dòng)物免疫病種的免疫培訓(xùn)方案，定期開(kāi)展技術(shù)培訓(xùn)，指導(dǎo)相關(guān)人員科學(xué)開(kāi)展免疫，加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)。